PCA besiyerindeb toplam canlı bakarken sürekli yayılma sorunu ile karşılaşıyorum, bu da petrilerimi okunmaz hale getiriyor. Seyreltmeyi yeterli yapıyorum, daha fazla seyrelttiğim dilüsyonlardan yaptığım ekimlerde de aynı problem var. Çalıştığım alanın , petrilerin , pipetlerin,etüvün hepsinin sterilizasyonundan eminim ,gerekli denetimleri de yapıyorum. Şahit petrilerde de bir sorun yok. Mikroskopta baktığımda yayılıcı floranın basillerden oluştuğunu görüyorum . Sizce bu yayılma problemini ortadan kaldırmak için ne yapmalıyım???

lilith84 yazan:
PCA besiyerindeb toplam canlı bakarken sürekli yayılma sorunu ile karşılaşıyorum, bu da petrilerimi okunmaz hale getiriyor. Seyreltmeyi yeterli yapıyorum, daha fazla seyrelttiğim dilüsyonlardan yaptığım ekimlerde de aynı problem var. Çalıştığım alanın , petrilerin , pipetlerin,etüvün hepsinin sterilizasyonundan eminim ,gerekli denetimleri de yapıyorum. Şahit petrilerde de bir sorun yok. Mikroskopta baktığımda yayılıcı floranın basillerden oluştuğunu görüyorum . Sizce bu yayılma problemini ortadan kaldırmak için ne yapmalıyım???

petri ucunda bir miktar örnek hep kalır..bunu nasıl petriye(besi yerine) gönderiorsun?

pipet demek istediniz sanırım..petriye bir kaç kez vurarak gönderiyorum.

evet pipet demek istemiÅŸtim..
bence kalan pipet ucunda kalsın çok azdır..birde o şekilde deneyin.
birde kullandığınız fizyolojik serum..hazırmı alıyorsunuz...yoksa sizmi hazırlıyorsunuz..
onun sterilizasyonuda etkili olabilir..şahitlerde birşey yoksa aklıma başka birşey pek gelmiyor..
farklılıklar bunlar olmalı diye düşünüyorum

Pipet ucundaki sıvıyı bıraktım ama sonuç yine de pek değişmedi. Bir de petrinin kenarlarını saracak şekilde yayılma okumayı daha da güçleştiriyor. Besiyerinin sıcaklığı da yayılma da bir hayli etkili.Besiyer 45 dereceden fazla olduğunda yoğunlaşmadan dolayı su damlacıkları nemli bir ortam oluşturuyor ve yine yayılma gözleniyor. Ne kadar petrileri etüve ters yerleştirsekte damlacıkların bir kısmı petri yüzeyinde kalıyor. Bunu tam olarak engelleyebilseydim yayılma olmazdı diye düşünüyorum.

Bir takım kaynaklarda pca nın üstüne ince bir kat daha pca ya da özelliksiz bir agar dökülerek mikroaerofilik bir ortam oluştulup yayılmanın kısmen engellenebileceğini savunuyorlar. Ben çift kat pca ile denedim bazılarında iyi sonuç alırken bazı petrilerin üzerlerinin tamamen tek bir koloniyle kaplandığını gördüm. Belki de sadece su agarla yapmak gerekiyordur bilemiyorum.Sadece denemek için de ısmarlamak biraz gereksiz gibi geliyor.

Dediğin elbette doğru..sende düşünmüşsündür ama ben yine buraya yazıyım örneğini petrilere koyduktan sonra, en son besi yerini dökeceğin zaman besi yerlerini su banyosundan çıkar...bence 45 C bile fazla çünkü PCA daki mik. org. optimum büyüme sıcaklığı 36-37 C civarı sende 40 C lerde sıcaklığı ayarla..bide su banyosunun sıcaklığının kalibrasyonuda önemli...damla sorununa belki bu şekilde bir hal çaresi bulabilirsin.
O diğer söylediğin şeyleri 2. bir kat besi yeri yada diğerlerini hiç uygulamadım.Gerekte yok bence.Kolay gelsin

teşekkür ederim, önerilerinizi dikkate alacağım ama 40 derecede sanki ben bütün petrilere dökene kadar besiyerleri jelleşmeye başlayacak gibi geliyor. bilirsiniz ufak ufak topaklar...herneyse yarın dereceyi ben biraz daha düşüreyim. bakalım ne olacak..

PCA da oluşan yayılmalar genellikle besiortamının neminin fazla olmasından dolayı haraketli mikroorganizma varlığına işarettir. bunun dışında görülen yayılma bakteri gibi gözüksede maya kolonilerinin bakteri morfolojisini bastırarak üremeye çalışmasından kaynaklanır.. Ayrıca analize alınıp petriye aktarılan numunenin üzerine dökülen besiyeri ile de tam olarak karışması gerekmektedir. Literatürlere de bakıldığında; tezgah üzerinde 8 çizermişçesine petrilerin döndürülmesini aksi taktirde tek yönde gelişim olacağı belirtiliyor.